- · 《汽车与驾驶维修(汽车版[05/29]
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建立甲醛作用SH-SH5Y细胞染毒模型的研究
作者:网站采编关键词:
摘要：室内装修材料及家具、纺织品、汽车内装饰物等含有一定的甲醛，在人们使用和接触过程中可通过呼吸和皮肤吸收等多种方式进入人体，可能产生神经毒性、淋巴细胞毒性、生殖毒性。
室内装修材料及家具、纺织品、汽车内装饰物等含有一定的甲醛，在人们使用和接触过程中可通过呼吸和皮肤吸收等多种方式进入人体，可能产生神经毒性、淋巴细胞毒性、生殖毒性。神经母细胞瘤细胞（SH-SH5Y细胞）是一种方便的神经模型，可制作与人类认知障碍相关的人类、灵长类特异性转录网络和通路。为了研究甲醛对神经细胞的毒性作用，采用甲醛对SH-SH5Y染毒检测细胞活力。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
主要试剂为甲醛（formaldehyde FA）分析纯，由中国上海试剂总厂生产；DMEM、胎牛血清（FBS）、质量分数为0.25%的胰酶消化液，为GibcoBRL公司生产；人神经母细胞瘤细胞系SH-SH5Y细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库（上海）；细胞活力检测试剂盒（CCK-8）购于碧云天生物技术研究所。
主要设备为酶标仪，Thermo Scientific Multiskan。
1.2 SH-SH5Y细胞培养
取SH-SH5Y细胞DMEM培养液（质量分数为10%的胎牛血清）处于37℃，在5%的CO2培养箱中培养3 d传代。
1.3 细胞显微拍片、计数与活力测定
取生长对数期的细胞用胰酶消化并计数，培养于96孔板中，每孔3×103；培养24 h后，甲醛FA浓度为2 mM、1 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0.062 5 mM，处理细胞24 h、48 h、72 h，每个浓度3个复孔。用CCK-8方法于酶标仪450 nm测定OD值。
由于CCK-8试剂对细胞无毒性，在CCK-8方法测定OD值后，显微镜下拍照。
1.4 数据分析
用SPSS17.0软件对获得的数据进行one-way ANOVA统计，并用Graphpad prism 5.0作图，所有结果至少重复3次。
2 结果
2.1 SH-SH5Y细胞培养
取 SH-SH5Y 细胞 5×103、4×103、3×103、2×103铺板 96孔板，培养12 h、24 h、48 h、72 h后，CCK-8方法于酶标仪450 nm测定OD值。细胞活力=（A药－A空）/（A对－A空）×100%.
当细胞数 4×103/孔培养 24 h、细胞数3×103/孔培养 48 h、细胞数2×103/孔培养72 h后，细胞活力与对照组无明显差异。
表1 甲醛对SH-SH5Y细胞细胞活力的影响注意：采用0 mmoL/L甲醛FA， *p＜0.05对照组，**p＜0.01对照组C（formaldehyde）/（mmoL/L）100. 100. 100. 0.062 5 98.** 99.** 99.**0.125 0 50.** 64.** 64.**0.250 0 22.** 11.** 8.**0.500 0 4.* 0.* 0.*1.000 0 1.* 0.* 0.*2.000 0 1. 0. 0. Cell viability/（%of control）24 h 48 h 72 h 0
图1 通过CCK-8，甲醛对SH-SH5Y细胞的细胞活力的影响
2.2 细胞活力测定
取生长对数期SH-SH5Y细胞培养于96孔板中，每孔3×103，培养24 h后，FA浓度为2 mM、1 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0.062 5 mM，处理细胞24 h、48 h、72 h，每个浓度3个复孔。同时，设对照孔（加等量细胞，不加FA）和空白孔（不加细胞、FA）。
用CCK-8方法于酶标仪450 nm测定OD值。细胞活力计算方式如上。随着染毒时间延长，细胞活力下降，差异具有统计学意义（*p＜0.05，**p＜0.01）。显微镜下观察细胞形态，甲醛（FA）＞1 mM，染毒24 h后，细胞明显变形；甲醛（FA）为0.5 mM，染毒24 h后，出现个别细胞未变形的情况；甲醛（FA）＜0.25 mM，染毒24 h后，细胞形态基本正常。
甲醛对SH-SH5Y细胞细胞活力的影响如表1所示。通过CCK-8，甲醛对SH-SH5Y细胞的细胞活力的影响如图1所示。
室内装修材料及家具、纺织品、汽车内装饰物等含有一定的甲醛，在人们使用和接触过程中可通过呼吸和皮肤吸收等多种方式进入人体，可能产生神经毒性、淋巴细胞毒性、生殖毒性。神经母细胞瘤细胞（SH-SH5Y细胞）是一种方便的神经模型，可制作与人类认知障碍相关的人类、灵长类特异性转录网络和通路。为了研究甲醛对神经细胞的毒性作用，采用甲醛对SH-SH5Y染毒检测细胞活力。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
主要试剂为甲醛（formaldehyde FA）分析纯，由中国上海试剂总厂生产；DMEM、胎牛血清（FBS）、质量分数为0.25%的胰酶消化液，为GibcoBRL公司生产；人神经母细胞瘤细胞系SH-SH5Y细胞购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库（上海）；细胞活力检测试剂盒（CCK-8）购于碧云天生物技术研究所。
主要设备为酶标仪，Thermo Scientific Multiskan。
1.2 SH-SH5Y细胞培养
取SH-SH5Y细胞DMEM培养液（质量分数为10%的胎牛血清）处于37℃，在5%的CO2培养箱中培养3 d传代。
1.3 细胞显微拍片、计数与活力测定
取生长对数期的细胞用胰酶消化并计数，培养于96孔板中，每孔3×103；培养24 h后，甲醛FA浓度为2 mM、1 mM、0.5 mM、0.25 mM、0.125 mM、0.062 5 mM，处理细胞24 h、48 h、72 h，每个浓度3个复孔。用CCK-8方法于酶标仪450 nm测定OD值。
文章来源：《汽车与驾驶维修(汽车版)》 网址: http://www.qcyjswx.cn/qikandaodu/2020/1210/508.html
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